Cum se face tampon de electroforeză 10X TBE

TBE și TAE sunt utilizate ca substanțe tampon în biologia moleculară, în principal pentru electroforeza acizilor nucleici. Tampoanele Tris sunt utilizate în condiții de pH ușor de bază, ca în cazul electroforezei ADN, deoarece acest lucru menține ADN-ul solubil în soluție și deprotonat, astfel încât va fi atras de electrodul pozitiv și va migra printr-un gel. EDTA este un ingredient în soluție, deoarece acest agent de chelare comun protejează acizii nucleici de degradarea de către enzime. EDTA chelează cationii divalenți care sunt cofactori pentru nucleazele care pot contamina proba. Cu toate acestea, având în vedere că cationul de magneziu este un cofactor pentru ADN-polimerază și enzime de restricție, concentrația de EDTA este menținută în mod intenționat scăzută (în jur de 1 mM).

Materiale tampon de electroforeză 10X TBE

• 108 g de bază Tris [tris (hidroximetil) aminometan]
• 55 g acid boric
• 7,5 g EDTA, sare disodică
• Apă deionizată

Pregătire pentru tamponul de electroforeză 10X TBE

1. Se dizolvă Trisul, acidul boric și EDTA în 800 ml apă deionizată.
2. Se diluează tamponul la 1 L. Se pot dizolva aglomerații albe nedizolvate prin plasarea sticlei de soluție într-o baie cu apă caldă. O bară de agitare magnetică poate ajuta procesul.

Nu trebuie să sterilizați soluția. Deși pot apărea precipitații după o perioadă de timp, soluția de stoc este încă utilizabilă. Puteți ajusta pH-ul folosind un pHmetru și adăugarea în picătură de acid clorhidric concentrat (HCl). Este bine să păstrați tamponul TBE la temperatura camerei, deși este posibil să doriți să filtrați soluția stoc printr-un filtru de 0,22 microni pentru a elimina particulele care ar favoriza precipitațiile.

Depozitare tampon cu electroforeză 10X TBE

Depozitați flaconul cu soluție tampon 10X la temperatura camerei. Refrigerarea va accelera precipitațiile.

Utilizarea tamponului de electroforeză 10X TBE

Soluția se diluează înainte de utilizare. Se diluează 100 ml 10X stoc la 1 L cu apă deionizată.

5X TBE Rețetă soluție stoc

Avantajul soluției 5X este că este mai puțin probabil să precipitați.

• 54 g de bază Tris (Trizma)
• 27,5 grame de acid boric
• 20 ml soluție EDTA 0,5 M
• Apă deionizată

preparare

1. Se dizolvă baza Tris și acidul boric în soluția EDTA.
2. Reglați pH-ul soluției la 8,3 folosind HCl concentrat.
3. Se diluează soluția cu apă deionizată pentru a face 1 litru de soluție stoc 5X. Soluția poate fi, de asemenea, diluată la 1X sau 0,5X pentru electroforeză.

Utilizarea unei soluții stoc 5X sau 10X din greșeală vă va oferi rezultate slabe, deoarece va genera cantitate de căldură. Pe lângă faptul că vă oferă o rezoluție slabă, eșantionul poate fi deteriorat.

Reteta tampon 0,5X TBA

• 5X TBE soluție stoc
• Apa distilată deionizată

preparare

Se adaugă 100 ml soluție 5X TBE la 900 ml apă deionizată distilată. Amestecați bine înainte de utilizare.

limitări

Deși TBE și TAE sunt tampoane de electroforeză obișnuite, există alte opțiuni pentru soluții conductoare cu molaritate scăzută, inclusiv tampon de borat de litiu și tampon de borat de sodiu. Problema cu TBE și TAE sunt că tampoanele bazate pe Tris limitează câmpul electric care poate fi utilizat în electroforeză, deoarece prea multă încărcare provoacă o temperatură scăpată.