Soluție salină tamponată cu fosfat sau soluție PBS
Share
PBS sau soluție salină tamponată cu fosfat este o soluție tampon care este deosebit de valoroasă deoarece imită concentrația de ioni, osmolaritatea și pH-ul fluidelor din corpul uman. Cu alte cuvinte, este izotonic pentru soluțiile umane, deci este mai puțin probabil să provoace daune celulare, toxicitate sau precipitare nedorită în cercetarea biologică, medicală sau biochimică.
PBS Compoziție chimică
Există mai multe rețete pentru prepararea soluției PBS. Soluția esențială conține apă, hidrogen fosfat de sodiu și clorură de sodiu. Unele preparate conțin clorură de potasiu și fosfat de potasiu dihidrogen. EDTA poate fi adăugat și în prepararea celulară pentru a preveni aglomerarea.
Salina tamponată cu fosfat nu este ideală pentru utilizarea în soluții care conțin cationi divalenți (Fe2+, Zn2+) deoarece pot apărea precipitații. Cu toate acestea, unele soluții PBS conțin calciu sau magneziu. De asemenea, rețineți că fosfatul poate inhiba reacțiile enzimatice. Fiți conștient în special de acest dezavantaj potențial atunci când lucrați cu ADN. În timp ce PBS este excelent pentru științele fiziologice, fiți conștienți că fosfatul dintr-un eșantion tamponat cu PBS poate precipita dacă proba este amestecată cu etanol.
O compoziție chimică tipică de 1X PBS are o concentrație finală de 10 mM PO43-, NaCl 137 mM și KCl 2,7 mM. Iată concentrația finală de reactivi din soluție:
| Sare | Concentrație (mmol / L) | Concentrație (g / L) |
|---|---|---|
| NaCl | 137 | 8 |
| KCI | 2.7 | 0.2 |
| N / A2HPO4 | 10 | 1.42 |
| KH2PO4 | 1.8 | 0,24 |
Protocol pentru producerea de soluție salină tamponată cu fosfați
În funcție de scopul tău, poți pregăti 1X, 5X sau 10X PBS. Multe persoane achiziționează pur și simplu comprimate tampon PBS, le dizolvă în apă distilată și ajustează pH-ul după cum este necesar cu acid clorhidric sau hidroxid de sodiu. Cu toate acestea, este ușor să faci soluția de la zero. Iată rețete pentru soluție salină tamponată cu fosfat 1X și 10X:
Reactiv | Cantitate de adaugat (1 ×) | Concentrație finală (1 ×) | Suma de adăugat (10 ×) | Concentrație finală (10 ×) |
| NaCl | 8 g | 137 mM | 80 g | 1,37 M |
| KCI | 0,2 g | 2,7 mM | 2 g | 27 mM |
| Na2HPO4 | 1,44 g | 10 mM | 14,4 g | 100 mM |
| KH2PO4 | 0,24 g | 1,8 mM | 2,4 g | 18 mM |
Opțional: | ||||
| CaCI2 • 2H2O | 0,133 g | 1 mM | 1,33 g | 10 mM |
MgCI2 • 6H2O | 0,10 g | 0,5 mM | 1,0 g | 5 mM |
- Se dizolvă sărurile de reactiv în 800 ml apă distilată.
- Reglați pH-ul la nivelul dorit cu acid clorhidric. De obicei, acesta este 7.4 sau 7.2. Folosiți un contor de pH pentru a măsura pH-ul, nu hârtia de pH sau altă tehnică imprecisă.
- Adăugați apă distilată pentru a obține un volum final de 1 litru.
Sterilizarea și stocarea soluției PBS
Sterilizarea nu este necesară pentru unele aplicații, dar dacă o sterilizați, distribuiți soluția în alicote și autoclave timp de 20 de minute la 15 psi (1,05 kg / cm)2) sau utilizați sterilizarea cu filtru.
Sarea salină tamponată cu fosfat poate fi păstrată la temperatura camerei. Poate fi, de asemenea, refrigerat, dar soluția 5X și 10X pot precipita la răcire. Dacă trebuie să răcoriți o soluție concentrată, păstrați-o mai întâi la temperatura camerei până când sunteți siguri că sărurile s-au dizolvat complet. Dacă apar precipitații, încălzirea temperaturii le va readuce în soluție. Perioada de valabilitate a soluției refrigerate este de 1 lună.
Diluarea unei soluții 10X pentru a face 1X PBS
10X este o soluție concentrată sau stoc, care poate fi diluată pentru a face o soluție 1X sau normală. O soluție 5X trebuie diluată de 5 ori pentru a face o diluare normală, în timp ce o soluție 10X trebuie diluată de 10 ori.
Pentru a prepara o soluție de lucru de 1 litru de 1X PBS dintr-o soluție 10X PBS, adăugați 100 ml soluție 10X la 900 ml apă. Acest lucru modifică doar concentrația soluției, nu gramul sau cantitatea molară a reactivilor. PH-ul nu trebuie afectat.
PBS versus DPBS
O altă soluție populară de tampon este soluția salină tamponată cu fosfat de Dulbecco sau DPBS. DPBS, la fel ca PBS, este utilizat pentru cercetarea biologică și tampoane în intervalul pH 7,2 - 7,6. Poate fi păstrat la temperatura camerei. Soluția de Dulbecco conține o concentrație mai mică de fosfat. Este de 8,1 mM mM ioni de fosfat, în timp ce PBS obișnuit este de 10 mM fosfat. Reteta pentru 1x DPBS este:
| Reactiv | Suma de adăugat (1x) |
| NaCl | 8.007 g |
| KCI | 0,201 g |
| N / A2HPO4 | 1.150 g |
| KH2PO4 | 0,200 g |
| Opțional: | |
| CaCl2• 2H2O | 0,133 g |
| MgCI2• 6H2O | 0,102 g |
